饲料中色氨酸的高效液相测定方法
| 饲料中色氨酸的高效液相测定方法 | |
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| 标准：GB/T 15400-2018 饲料中色氨酸的测定 | 项目：色氨酸 |
| 原理：饲料蛋白在110℃碱的作用下水解，水解出的色氨酸可用离子交换色谱或高效反相色谱分离、测定。 | 正确度：在重复性条件下，当试样中色氨酸含量小于0.1%时，两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.01%。 当试样中色氨酸含量在0.1%-0.5%时，两次独立测定结果与其平均值的绝对差值，应不大于该平均值的3%。 当试样中色氨酸含量大于0.5%时，两次独立测定结果与其平均值的绝对差值，应不大于该平均值的2%。 |
| 内容： 碱解剂——氢氧化锂=4mol/L：称取一水合氢氧化锂16.78克，用水溶解并稀释至100ml，使用前取适量超声或通氮脱气。 流动相：乙酸钠缓冲液+甲醇=95+5 乙酸钠缓冲液，C（Na+）=0.0085mol/L，PH=4.5的乙酸钠溶液：称取0.70克无水乙酸钠，溶解于1000ml水中，用冰乙酸调节PH为4.5，用0.45um的滤膜过滤。 氢氧化钾溶液（0.1mol/L）：称取0.56克氢氧化钾，溶解于100ml水中，即得。 平行做两份试验。称取未脱脂试样50~100mg（精确至0.0001g）于5ml的聚四氟乙烯离心管中，加入1.50mL碱解剂（3.3），于液氮或干冰乙醇（丙酮）中冷冻（此步骤可省略），将离心管插入氧化水解用肖特瓶中，充氮1-2min后拧紧瓶盖。放入110±1℃恒温干燥箱，水解20h。取出冷却至室温后开瓶盖，用乙酸钠缓冲液（3.6.1）将水解液定量地转移至25mL容量瓶中，并用乙酸钠缓冲液（3.6.1）定容，混匀。经0.45μm滤膜过滤，供上机测定。 | 参数：色谱柱：柱长150或250mm，内径4.6mm，粒度5um；(或相当的C18柱）。 柱 温：室温； 检测器：紫外检测波长：280nm； 荧光检测：激发波长：283nm； 发射波长：343nm； 流 速：1.0ml/min； 进样量：10-20ul； |
| 计算： 试样中L-色氨酸的含量Wi（mg/kg），按公式计算： 未脱脂试样中色氨酸含量（%）： Wi=(Pi×V×Ci×Vst)/(Psti×m×Vi)*10-4 *10-4 脱脂试样中色氨酸含量（%）： Wi=(Pi×V×Ci×Vst)/(Psti×m×Vi)*（1-F）*10-4 式中：Pi— 试样溶液峰面积值； V — 提取液的总体积，单位为毫升（ml）； Ci— 标准溶液浓度，单位为微克每毫升（ug/ml）； Vst—标准溶液进样体积，单位为微升（ul）； —标准溶液峰面积平均值； m — 试样质量，单位为克（g）； Vi— 试样溶液进样体积，单位为微升（ml）； F— 脂肪含量，%。 |
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